محیطهای کشت

محیطهای کشت

محیط های کشت افتراقی برای باکتری گرم منفی :

محیطهای کشت افتراقی تنها به باکتری های گرم منفی اجازه رشد را می دهند و از رشد باکتری گرم مثبت جلوگیری می کنند .

انواع محیط های افتراقی شامل :

         .     سیمون سیترات آگار

         .     رد بوراث

         .     EMB

         .     IMviC

         .     TSI

         .     اوره آز

محیط سیمون سیترات آگار :

این محیط یکی از محیط های افتراقی باکتری گرم منفی است و حاوی منبع کربن سیترات    می باشد . رنگ محیط کشت سبز است . تهیه این کشت در لوله های آزمایش و به صورت کج انجام می شود . طرز کشت باکتری در این محیط به صورت زیر می باشد :

         .     ابتدا فیلدوپلاتین با سر گرد را استریل می کنیم و مقداری باکتری (سراشیا) از محیط کشت برمی داریم .

         .     فیلدوپلاتین را وارد محیط کشت سیمون سیترات آگار کرده و به صورت مارپیچی روی سطح محیط می کشیم (اسلنت) .

         .     سپس محیط کشت را به مدت 24 ساعت در حرارت 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور قرار می دهیم و بعد نتایج را مشاهده می کنیم :

                    .     اگر باکتری منبع کربن را مصرف نکند محیط سبز رنگ باقی می ماند .

                    .     اگر باکتری منبع کربن را استفاده کند رنگ محیط  آبی نفتی می شود .

نتایج و مشاهدات :

باکتری مورد نظر سراشیا بوده و در محیط سیمون سیترات آگار رشد کرده ودر اثر مصرف منبع کربن ایجاد رنگ آبی نفتی در محیط کرده است .

محیط رد بوراث :

این محیط نیز یک محیط افتراقی به شمار می آید که حاوی منبع قند (گلوکز) می باشد . محیط مایع وقرمز رنگ می باشد . در لوله دورهام تهیه می شود . طرز کشت باکتری در این محیط به شرح زیر می باشد :

         .     ابتدا فیلدوپلاتین با سر گرد را استریل می کنیم و مقداری باکتری از محیط کشت برمی داریم .

         .     فیلدوپلاتین را وارد محیط رد بوراث می کنیم و فیلدوپلاتین را تکان می دهیم تا باکتری ها در محیط آزاد شوند (تلقیحیی)

         .     لوله را به مدت 24 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور قرار داده و بعد نتایج را مشاهده می کنیم :

                    .     اگر باکتری از منبع قند استفاده نکند محیط قرمز رنگ باقی می ماند .

                    .     اگر باکتری از منبع قند استفاده کند :

                                   .     تولید اسید (محیط زرد رنگ)

                                   .     تولید اسید همراه با گاز(محیط زرد و مشاهده گاز در لوله )

نتایج و مشاهدات :

باکتری سراشیا قند موجود در محیط را تجزیه کرده و محیط را به رنگ زرد در آورده است .

 محیط کشت  EMB(آئوزین متیلن بلو) :

یک محیط انتخابی – افتراقی حاوی مواد زیر است :

·         پروتئین

·         بافر

·         متیلن بلو

·         ائوزین

·         کربوهیدرات های سوکروز و لاکتوز

رنگ های ائوزین و متیلن بلو مانع از رشد باکتری های گرم مثبت شده و به باکتری های گرم منفی اجازه رشد می دهند . لاکتوز و ساکاروز منبع کربن اند و باکتری ها بر اساس توانایی تخمیر و عدم تخمیر لاکتوز از هم جدا می شوند . (ساکاروز منبع کربن برای باکتری هایی است که لاکتوز را تخمیر نمی کنند) .

لاکتوز مثبت ها کلنی تیره و لاکتوز منفی ها کلنی شفاف تولید می کنند .

 MCA (مک کانکی آگار) :

این محیط ، یک محیط انتخابی – افتراقی است که سبب رشد انتروباکتریاسه و باکتری گرم منفی و افتراق لاکتوز + ها از لاکتوز – ها می شود . حاوی مواد زیر است :

·         پروتئین

·         نمک صفراوی

·         کلرید سدیم

·         لاکتوز

·         کریستال ویوله

·         قرمز خنثی

عمل انتخابی محیط مربوط است به کریستال ویوله و نمک صفراوی که مانع رشد گرم مثبت ها می شوند. آنها که لاکتوز مثبت اند به رنگ قرمز صورتی اند که ناشی از تولید اسید از تخمیر لاکتوز و جذب آن توسط نوترال رد و بدنبال آن تغییر رنگ معرف به قرمز می باشد.  لاکتوز منفی ها کلنی بی رنگ ایجاد می کنند  

محیط کشت IMviC :

         .     I : محیط SIM معرف ایندول

         .     Mvi : محیط های Mr  و Vp

         .     C : سیمون سیترات آگار